Characterization of bovine ileal epithelial cell line for lectin binding,susceptibility to enteric pathogens,and TLR mediated immune responses

In this study, primary and immortalized bovine intestinal epithelial cells (BIECs) were characterized for the expression of surface carbohydrate moieties. Primary BIEC-c4 cells showed staining greater than 90 % for 16 lectins but less than 50 % staining for four lectins. Immortalized BIECs showed significantly different lectin binding profile for few lectins compared to BIEC-c4 cells. BIEC-c4 cells were studied for infectivity to E. coli, Salmonella enterica, bovine rotavirus, bovine coronavirus, and bovine viral diarrhea virus. Bovine strain E. coli B41 adhered to BIEC-c4 cells and Salmonella strains S. Dublin and S. Mbandaka showed strong cell invasion. BIEC-c4 cells were susceptible to bovine rotavirus. LPS stimulation upregulated IL-10, IL-8, and IL-6 expression and Poly I:C upregulated TLR 8 and TLR 9 expression. This study provides important knowledge on the glycoconjugate expression profile of primary and immortalized BIECs and infectivity and immune responses of primary BIECs to bacterial and viral pathogens or ligands.     

抗牛布鲁氏菌独特型抗体杂交瘤细胞（Ｆ９）的生长和代谢

用RPMI1640培养基对抗牛布鲁氏菌独特型抗体杂交瘤细胞株(F9)进行培养，并对其生长代谢进行测定。该细胞不论接种1.1×10     

BA—Dot—ELISA检测牛结核血清抗体的研究

利用BA—Dot—ELISA检测72份结核变反阳性牛血清,阳性率为69.5％,比常规ELISA(44.4％)高。用该法检测布鲁氏菌病、粘膜病、传染性鼻气管炎、白血病病牛血清及堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌高免牛血清均无交叉反应,但对50份副结核变反阳性牛血清出现了一定的交叉。该法重复性好,简便快速,结果判定不需特殊仪器。     

不同浓度CO2对牛卵母细胞体外成熟和受精的影响

对牛卵巢卵泡内卵母细胞在不同浓度的CO2培养箱内体外成熟、体外受精后的卵裂率及胚胎体外发育进行了研究。结果显示,含5%小牛血清(CS)的TCM-199内的卵母细胞在2%CO2条件下培养20h后,达到第二次减数分裂期(MⅡ期)的卵子数明显高于在5%CO2条件下培养的卵母细胞数(P<0.05)。两种浓度的CO2条件下培养的牛卵母细胞体外受精后的卵裂率无明显差异,2%CO2浓度下培养的卵母细胞的囊胚发育率高于5%CO2浓度下培养的卵母细胞。     

牛皮肤成纤维细胞的体外培养与冻存

利用牛皮肤组织块直接培养法，得到牛皮肤细胞的原代培养物，再用酶消化法和反复贴壁法处理，能够纯化成纤维细胞。成纤维细胞的冻存是通过选用6种分别含有二甲基亚砜（DMSO）、甘油（GL）及乙二醇（EG）的保护液，以相同的冻前处理方法，对牛皮肤成纤维细胞进行缓慢冷冻，冰箱预冷平衡1－2h，逐步投入液氮（－196℃）中保存，再经37℃水浴解冻，Hanks液脱保护剂，以贴壁率评价冻存效果。结果表明，20％DMSO保护液对牛皮肤成纤维细胞表现出较好且稳定的冷冻保护效果，其平均贴壁率达87．9％。     

奶牛乳腺炎防治的免疫学和药理学机制

奶牛乳腺炎是一种复杂的多因素疾病，给世界各国奶牛业造成了巨大的经济损失，而至今未能提出一个彻底解决的办法。本文综述了奶牛乳腺炎的致病因素、乳腺的免疫机制和乳腺炎治疗的药理学机制方面的研究进展，重点剖析了乳腺特殊的免疫体系和乳腺炎治疗的药理学特点，分析阐明了奶牛乳腺炎免疫和治疗失败的原因。     

用分子生物学方法鉴别检测动物源性饲料中的牛羊源性成分

为了防止海绵状脑病疫区和痒病疫区反刍动物源性饲料进入我国 ,非常有必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定检测。我们采用分子生物学方法从动物源性饲料中鉴别检测牛、羊特异性线粒体DNA的片段 ,并用限制性内切酶SspⅠ对PCR产物进行酶切鉴定及DNA序列测定。该方法的灵敏度可达 0 .12 5 % ,具有灵敏度高、快速和特异性强的优点。     

牛流行热病毒灭活疫苗免疫后牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究

对牛流行热病毒灭活疫苗免疫并攻每后，牛外周血淋巴细胞亚类的变化进行了研究。结果表明，灭活苗免疫后，牛的CD4^ 显著升高，可能与参与辅助B淋巴细胞合成抗体有关，攻毒后，γδT细胞均显著上升，免疫组在攻毒后3周仍保持在相当的高水平，IL－2Rα阳性细胞在攻毒后高热期也有显著升高，而CD8^ 细胞没有明显变化。     

奶牛乳房炎多联苗(B)的临床免疫试验

用奶牛乳房炎多联苗 (B)免疫家兔 ,14 d血清中金黄色葡萄球菌抗体效价可达 1∶ 8,2 8d抗体水平明显升高 ,可达 1∶ 32 ,注苗后 35 d攻毒 ,攻毒后 2 d保护率为 93.3% (14 /15 ) ,自然保护率为 2 0 % (1/5 ) ,10 d保护率为 6 6 .6 % (10 /15 ) ,自然保护率为 2 0 % (1/5 ) ;用多联苗 (B)臀部肌肉注射免疫泌乳牛 ,试验期间 4个月内 ,3ml剂量组临床型乳房炎月平均发病率为 11.0 9% ,其对照组为 2 0 .19% ,发病率降低 4 5 .2 9% ,差异极显著 (P<0 .0 1) ;5 m l剂量组月平均发病率为 13.0 1% ,其对照组为 31.36 % ,发病率降低 5 8.5 1% ,差异极显著 (P<0 .0 1) ;3ml剂量组与 5 m l剂量组之间发病率无明显差异 (P>0 .0 5 ) ;注苗后泌乳牛血清抗体水平可持续 4个月 ,且 30 d时效价水平最高。     

传染性牛鼻气管炎亚单位疫苗免疫原性的研究

用犊牛睾丸细胞培养传染性牛鼻气管炎病毒（IBRV），反复冻融，差速离心提取病毒，用Triton X-100溶解，超声波处理，制成IBRV TritonX-100亚单位抗原，经SDS－PAGE电泳，其分子量在176kD-53kD之间，其中有6条清晰的蛋白带。该抗原与一定比例的白油－司盘佐剂乳化，接种育成年，经间接ELISA检测，可使接种的育成牛产生高效价的血清抗体（OD492mm=1.57)。2种不同剂量（80mg/头，40mg／头）的IBRV亚单位疫苗接种育成牛，体内抗体效价相差不显著，抗体可在体内持续12周，用IBRV TrionX-100亚单位疫苗2次接种育成牛，其体内抗体效价显著高于用灭活疫苗2次接种育成牛体内的效价。试验结果表明：提取的IBRV多肽制作的亚单位疫苗具有良好的免疫原性，且抗体持续时间较长。